TUNEL检测

TUNLE即原位末端转移酶标记技术。凋亡细胞的DNA双链断裂或一条链出现缺口，产生一系列3′-OH末端，在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）作用下，将脱氧核糖核苷酸和生物素所形成的衍生物标记到DNA的3′末端，从而进行凋亡细胞的检测。TUNEL是分子生物学与形态学相结合的研究方法，对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色，能准确的反应细胞凋亡典型的生物化学和形态特征，可用于石蜡包埋组织切片、冰冻组织切片、培养的细胞和从组织中分离的细胞的细胞凋亡测定，并可检测出极少量的凋亡细胞，灵敏度远比一般的组织化学和生物化学测定法要高，因而在细胞凋亡的研究中已被广泛采用。

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更新时间：2024-10-22
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TUNEL检测的原理:

细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时，暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上荧光素 (FITC) 标记的dUTP (fluorescein-dUTP) ，从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测，这就是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法检测细胞凋亡的原理。

TUNEL检测（石蜡切片）	取下适当的新鲜的组织块固定于4%-10%浓度的多聚甲醛或中性甲醛中，甲醛与组织块体积比在10:1和20:1之间，4摄氏度保存运输；
TUNEL检测（冰冻切片）	取下的新鲜组织应立即放入超低温冰箱或者液氮中，用干冰运输，固定好的切片应于-80或者-20度保存，并尽快用于检测；
TUNEL检测（细胞爬片）	细胞爬片4%多聚甲醛4度固定30min，换PBS缓冲液4度保存运输，尽快用于检测；

荧光法需要先拍一张凋亡荧光图，再拍一张原位染核图，再合并图层，终我们提供的为三张荧光图片。

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